“Possível contribuição do receptor c-met na patogenia patogenia de fenômenos metastáticos em células A431" 

A função fisiológica do fator XII (FXII) da coagulação permanece um mistério, uma vez que sua ausência natural, genética ou sua inibição farmacológica não induzem a prejuízo na performance do processo da coagulação sanguínea in vivo. Um conjunto crescente de evidências sugere que este fator exerça algumas funções características dos denominados fatores de crescimento. Este fator, que apresenta em sua molécula três domínios semelhantes ao fator de crescimento epidérmico (EGF), exerce atividade mitogênica em células endoteliais derivadas da veia umbilical humana (HUVECs), através principalmente da ativação dos receptores EGFR. Adicionalmente, variados estudos sugerem sua participação na patogenia de processos trombóticos, tumorais e/ou metastáticos. A via do fator de crescimento de hepatocitos (HGF) é formada por duas proteínas plasmáticas: o ativador do HGF (HGFA) e seu substrato proHGF, e o receptor c-met. 

No contexto da malignidade, a ativação sustentada do c-met leva ao acionamento de variadas cascatas sinalizadoras intracelulares, envolvendo uma infinidade de quinases que iniciam um programa invasivo e metastático. As células específicas da linhagem celular de carcinoma epidermoide humano A431 apresentam alta expressão de receptores EGFR. Os fatores de crescimento transformador α (TGFα) ou EGF ativam dos receptores EGFR e aumentam subsequentemente a fosforilação do receptor c-met nestas células, mas o HGF exógeno não afeta a fosforilação do receptor EGFR. Neste trabalho os objetivos são determinar a possível fosforilação (por western blot) do receptor c-met (na posição Tyr1234/1235 no domínio met quinase) em células A431 em células estimuladas com doses apropriadas de FXII. Assim sendo, estas células serão incubadas com doses apropriadas dos seguintes agonistas, de acordo com os seguintes grupos experimentais (GE): (GP1) EGF, que induzem à fosforilação do receptor EGFR e que fosforiliza simultaneamente o receptor c-met; (GP2) FXII; (GP3) HGF, na presença ou ausência de doses padronizadas de INC28060, um inibidor específico do receptor c-met e (GP4) estes agonistas (HGF, FXII e EGF) na presença do inibidor específico do receptor EGFR tyrphostin AG1478. A confirmação desta hipótese (fosforilação da  posição Tyr1234/1235 no domínio met quinase após a ativação do receptor EGFR pelo FXII) poderá ajudar na compreensão do possível envolvimento deste fator em alguns processos patológicos e da patogenia de fenômenos metastáticos em alguns tumores, em especial daqueles derivados de células epiteliais.

Colaborações com outras equipes de pesquisa 

Como responsável pelo equipamento multiusuário (aparelho de tromboelastometria rotacional – ROTEM four channel system – Pentapharm, Munich, Germany), participei como colaborador em alguns trabalhos liderados por pesquisadores da Instituição, na avaliação de possíveis atividades pró ou anticoagulantes de venenos ofídicos ou de artrópodes, citados a seguir: 

I Projeto: “Estudo comparativo de moléculas de baixa massa molecular de serpentes Elapidae de diferentes continentes: descobrindo aspectos bioquímicos e biológicos de moléculas bioativas negligenciadas” – Aluna Mônica Viviana Abreu Falla / “Avaliação bioquímica e da atividade do veneno de Bothrops jararaca em função do tempo de estocagem” – Aluna Heloisa Isabel Ferreira de Almeida. Observação: ambos os projetos liderados pelo pesquisador Ivo Lebrun (ivo.lebrun@butantan.gov.br)

II Projeto: “Caracterização da possível atividade anticoagulante do veneno da serpente Micrurus spixii e das atividades neutralizadoras do soro antielapídico e do composto sintético Varespladib, um inibidor dos fatores IIa, V e da phospholipase A2 presente no veneno desta serpente” – Aluna de doutorado do curso de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas da Universidade de Sorocaba: Nathalia Cantuária (nathmcantuaria@gmail.com). Orientadora: Profa. Dra. Yoko Oshima Franco. Coorientador: Dr José Maria Gutiérrez (Senior Professor, Clodomiro Picado Institute, Faculty of Microbiology. Lic. in Microbiology and Clinical Chemistry, University of Costa Rica) 

IV Projeto: “Avaliação de possível compatibilidade sanguínea de nanomateriais”. Coordenador: Dr. Alioscka Augusto Caldeira Araújo Souza - Departamento de Bioquímica (UNIFESP) - Contato: alioscka.sousa@unifesp.br 

V Projeto: “Caracterização do perfil coagulotóxico de venenos de serpentes da família Viperidae de importância médica no Brasil”. Auxílio regular de pesquisa 2020/07268-2 - Vigência 01/05/2022 a 31/07/2024. Coordenador: Karen de Morais Zani - Instituto Butantan/IB/SSSP – Contato: karen.zani@butantan.gov.br 

VI Projeto: “Avaliação de métodos alternativos in vitro à utilização de animais para os ensaios in vivo no estudo de venenos de serpentes: Princípio dos 3R's”. Auxílio regular de pesquisa 2021/11707-4 Vigência 01/05/2022 a 31/07/2024. Coordenador: Anita Mitico Tanaka-Azevedo - Instituto Butantan/IB/SSSP. Contato: anita.azevedo@butantan.gov.br

1. Prezoto BC, Tanaka-Azevedo AM, Marcelino JR, Tashima AK, Nishiduka ES, Kapronezai J, Mota JO, Rocha MMT, Serino-Silva C, Oguiura N. A functional and thromboelastometric-based micromethod for assessing crotoxin anticoagulant activity and antiserum relative potency against Crotalus durissus terrificus venom. Toxicon; 148: 26-32. Citado por http://scholar.google.com 13     Web of Science  7;
2. Oguiura N, Kapronezai J, Ribeiro T, Rocha MM, Medeiros CR, Marcelino JR, Prezoto BC. An alternative micromethod to access the procoagulant activity of Bothrops jararaca venom and the efficacy of antivenom. Toxicon 2014; 90: 148-154. Citado por http://scholar.google.com 24     Web of Science 18 . Prêmio - Agraciado com o prêmio “for Rest of the world”, da versão 2015 do IQ Consortium and Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care (AAALAC) International Global 3Rs Awards program, em 4 de Novembro de 2015;  
3. Bernardoni JL, Sousa LF, Wermelinger LS, Lopes AS, Prezoto BC, Serrano SM, Zingali RB, Moura-da-Silva AM. Functional variability of snake venom metalloproteinases: adaptive advantages in targeting different prey and implications for human envenomation. PLoS One 2014; 9: e109651  -  Citado por http://scholar.google.com  82     Web of Science 53;
4. Hayashi MA, Murbach AF, Ianzer D, Portaro FC, Prezoto BC, Fernandes BL, Silveira PF, Silva CA, Pires RS, Britto LR, Dive V, Camargo AC. The C-type natriuretic peptide precursor of snake brain contains highly specific inhibitors of the angiotensin-converting enzyme. J Neurochem 2003; 85: 969-977. Citado por http://scholar.google.com  97     Web of Science  65; 
5. Mini Editorial (convidado): Prezoto BC: "Understanding the Bothrops moojeni venom - very appropriate challenge" on the review manuscript: Natália Barreira Silva, Edigar Henrique Vaz Dias, Júnia de Oliveira Costa, Carla Cristine Neves Mamede. Bothrops Moojeni Snake Venom: A Source of Potential Therapeutic Agents Against Hemostatic Disorders. Int J Cardiovasc Sci. 2024; 37:e20220075 DOI: https://doi.org/10.36660/ijcs.20220075 
6. Prezoto BC, Lima PH, Tanaka-Azevedo AM, Ikedo JM, Farias Rodrigues MA, de Camargo Gonçalves LR, de Morais-Zani K. Differential coagulotoxic activity of Lonomia obliqua venom on human and chicken plasmas. Toxicon. 2026; 271:108947
7. Venancio de Lima EO, Tasima LJ, Hatakeyama DM, Farias Rodrigues MA, Serino-Silva C, Stuginski DR, Machado da Silveira GP, Prezoto BC, Grego KF, Sant'Anna SS, Tanaka-Azevedo AM, de Morais-Zani K. Understanding the effects of Bothrops erythromelas and Bothrops leucurus venoms on human blood coagulation. Toxicon. 2025; 255:108231
8. Mina N, Guido VS, Prezoto BC, Oliva MLV, Sousa AA. How Dendrimers Impact Fibrin Clot Formation, Structure, and Properties. ACS Omega. 2024; 9(52):51306-51319.
9. Guido VS, Olivieri PH Jr, Brito ML, Prezoto BC, Martinez DST, Oliva MLV, Sousa AA. Stealth and Biocompatible Gold Nanoparticles through Surface Coating with a Zwitterionic Derivative of Glutathione. Langmuir. 2024; 40(23):12167-12178.

1. Processo FAPESP Programas Regulares / Auxílios à Pesquisa / Publicações / Artigo - Fluxo Contínuo número 2020/01820-5 - Título em Português “Plasma de galinha deficiente em fator XII como alvo apropriado para triagem de toxinas pro- ou anticoagulantes provenientes de venenos animais”. Vigência 01/05/2020 a 31/10/2020. Situação: Encerrado. C. recursos em reais  8.968,32 
2. Processo FAPESP Programas Regulares / Auxílios à Pesquisa / Projeto de Pesquisa / Projeto de Pesquisa - Regular - Fluxo Contínuo número 2016/00211-0. Título em Português “Participação da via do fator de crescimento de hepatócitos na fisiopatologia do envenenamento experimental de ratos  pelos venenos de Bothrops jararaca e Crotalus durissus terrificus”   Vigência 01/08/2016 a 31/01/2019. C. recursos em reais  82.622,65
3. Processo FAPESP - Programa Auxílio à Pesquisa – regular número 2004/12858-0– projeto de pesquisa “Estudo do possível efeito cardio-protetor do sistema calicreína-cininas em modelo de lesão isquêmica+reperfusão miocárdica em aves”. Vigência 01/05/2005 a 31/10/2007; 
4. Processo FAPESP Programa Auxílio à Pesquisa – Regular número 2009/54620-4– projeto de pesquisa “Avaliação da atividade pró-coagulante do ácido ribonucleico (RNA) sobre a via intrínseca da coagulação sanguínea em mamíferos e aves”. Vigência de 01/05/2010 a 30/04/2012. 

Catarina de Fátima P. Teixeira – Pesquisador VI

Cristina Maria Fernandes – Pesquisador VI 

Rodrigo Maia Marques – Estudante